□ 封立平 梁成珠 郭 强

山东检验检疫局完成的国家质检总局科技计划项目“重要检疫性植物细菌的LAMP检测筛选技术研究”，实现了检疫性植物病原细菌的快速、精准、即时筛选检测技术，五种LAMP快速检测试剂盒一经在植物检疫领域推广应用，就取得了良好的效果。该项目成果填补了国内外相关研究领域的空白，研究成果达到国际先进水平。

检疫性植物病原细菌是我国制定的进境植物检疫性有害生物名录的重要组成部分。近10余年，尤其是我国加入世界贸易组织以来，国际贸易自由化程度不断提高，进出境植物及其产品的贸易迅速增长，促进了我国农业的改革和发展。面对农产品市场日益开放的新局面，进出境口岸检疫既要有利于促进国际贸易的发展，又要防止外来危险性有害生物的传入，口岸检疫面临严重挑战。

风险巨大 急需攻关

国际上，一些国家从自身利益出发，通过实施技术性贸易措施，对进口农产品进行限制，植物病原细菌作为具有重要经济影响和检疫意义的一类有害生物，正在成为各国制定技术性贸易措施的重要考虑因素。降低成本、简化操作、不断更新的高通量检疫性植物细菌快速检测和筛选方法在进出口植物检疫工作中将承担重要的角色，为检疫技术的发展带来革命性的影响。

在植物病原细菌检测领域，目前的技术手段包括细菌常规分离、生理生化鉴定和PCR技术等都已经不能满足口岸检测快速、及时、准确、低成本的需求。环介导的等温核酸扩增（简称LAMP）技术是一种全新的基因诊断技术，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，受到了世卫组织、政府部门和各国学者的关注。它与PCR相比优势明显，除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅就能实现反应，适合大量、即时的病原微生物检测。

为尽快把这项新技术应用于植物检疫领域，山东检验检疫局及时提出了“重要检疫性植物细菌的LAMP检测筛选技术研究”项目，经过课题组长期的攻关和试验，终于研究成功了检疫性植物病原细菌的LAMP筛选检测技术，并研发了其中五种检疫性植物病原细菌的LAMP检测试剂盒，申请5项发明专利，在核心期刊发表论文5篇。经该项目输出的国家标准“GB/T 28096-2011木薯细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法”、行业标准“SN/T 3296-2012植物病原细菌分子检测规范”等，分别于2011年、2012年发布实施，已在全国检验检疫系统中得到广泛应用。

填补空白 快速发展

该课题首次建立了玉米细菌性枯萎病菌、木薯细菌性萎蔫病菌、豌豆细菌性疫病菌、梨火疫病菌、番茄溃疡病菌等五种检疫性植物病原细菌的LAMP快速、高效的检测技术，填补了国内外相关研究领域的空白。课题研发的五种检疫性植物病原细菌的LAMP检测试剂盒特异性、敏感性、稳定性和重复性好，可用于植物产品中相关检疫性病害的快速筛检，并可大幅度压缩检测成本，突破了植物病原细菌长期以来检测周期长、检测敏感度低的技术瓶颈。

在国家质检总局科技司召开的科研项目鉴定会上，专家组一致对山东检验检疫局牵头完成的总局科研项目“重要检疫性植物细菌的LAMP检测筛选技术研究”给予了高度评价。珠海检验检疫局检验检疫技术中心也给出了较高的验证结论：“课题组研发的五种植物病原细菌的 LAMP检测筛选技术检测费用低，操作简单，在一管内即可以完成全部检测，并且反应产物可以直接通过肉眼观测染液的颜色变化来判断靶序列扩增与否。适合现场即时检测，在植物病原细菌的快速检测方面具有较大的实用价值。”

木薯与植物病原细菌检疫重点实验室紧密围绕实际工作，解决在检验检疫工作中出现的难点、热点问题，实现了检疫科研工作和创先争优工作的双重提升，取得了一批具有极高时效性、实效性和前瞻性的科技部、质检总局等重大课题。完成植物病原细菌类国家质检总局科研项目5项，制定植物病原细菌类国家、行业标准10余项。这些成果中的大多数已转化为农产品检测的有效工具，并成功应用到进出口农产品的检疫工作中，有力地促进了植物检疫工作的快速发展。

重点跨越 前景广阔

这个科研项目虽然只是这些丰硕成果的一个代表，但却反映出了山东局国家木薯与植物病原细菌重点实验室工作人员“自主创新、重点跨越、技术支撑、引领未来”的先进工作理念。

该项目经过3年时间的推广与应用，已经展现出了非常广阔的应用前景。特别是在提升质检履职把关能力、防止有害生物入侵扩散，保障国家农业生产安全、保护我国种苗、木薯种质资源的安全引进和产业健康发展方面起到了积极的作用。在该项目的鉴定会上，植物检疫领域首席专家朱水芳研究员指出：“该项目是植物检疫领域病原细菌检测技术的一个全新突破，应该进一步加大推广的力度，给检验检疫提供更好的技术支持。”

作为该科研项目开发的新技术成果之一，目前项目组已完成了五种检疫性植物病原细菌LAMP检测试剂盒的研发，并已逐步在检验检疫检测领域投入应用，在口岸一线检测实验室得到了满意的反馈意见。如厦门检验检疫局检验检疫技术中心2012年全国首次从进口加拿大豌豆中截获并鉴定检疫性病害豌豆细菌性疫病菌的过程中，运用该项目组提供的豌豆细菌性疫病菌LAMP快速检测试剂盒进行了验证实验，实验表明该试剂盒在病害检测的特异性、敏感性、稳定性方面都比传统方法有了大幅提高，对病害检出起到了关键作用。

目前该项目的研发人员正进一步优化这项新技术成果的实验条件，并以此为平台开发更多的植物病原细菌检测项目试剂盒。该项目开发的植物病原细菌LAMP检测技术和一系列植物病原细菌LAMP检测试剂盒将给检验检疫系统和农业、林业植保部门进行病害检验检疫及病害监测防控提供新的技术保障，为我国的农业贸易和生产保驾护航。

该项目成果2011年至2012年间应用在北京市海淀种子商会、山东省种子有限责任公司、青岛市植物保护总站、广西壮族自治区亚热带作物研究所等单位，用于基地蔬菜、大田作物种子、花卉、苗木种植过程中检疫性植物病原细菌的监测，取得了良好的防控效果。2012年，此项技术成果为北京市海淀种子商会多个种业公司在甘肃的几十个制种基地提供了能够进行田间即时筛检的方法，为种子企业和基地农业公司产品出口提供了质量的保证，促进了商品种子的出口贸易，产生了巨大的社会效益。青岛市植物保护总站连续3年运用该项目研发的LAMP检测筛选技术来监测种苗和粮食作物种植期间的植物病害，不仅提高了监测水平，还大大降低了监测的费用。